Laporan
Praktikum Nama : Eka Lindawati
Mikrobiologi Kelompok : 8
NIM : J3L112138
Hari,tanggal : Jum’at, 20-09-2013
Waktu : 14.00-17.20 WIB
PJP : M. Arif Mulya, S.Pi
Asisten : Lia Suliani
Ramdhani
Yuriska Sekar Rani
PENYIAPAN MEDIA DAN SCREENING BAKTERI
PROGRAM
KEAHLIAN ANALISIS KIMIA
PROGRAM
DIPLOMA
INSTITUT
PERTANIAN BOGOR
BOGOR
2013
Pendahuluan
Mikrobiologi adalah suatu cabang ilmu
biologi yang mempelajari tentang mikroorganisme dan interaksi mereka dengan
organisme lain dan lingkungannya (Singleton 2006). Dunia mikroorganisme terdiri
dari lima kelompok organisme : bakteri, protozoa, virus, serta algae dan
cendawan mikroskopis (Pelczar 2006). Istilah bakteri berasal dari kata bakterion (bahasa yunani) yang berarti
tongkat atau batang. Morfologi bakteri terbagi atas 3 macam yaitu, pertama
bentuk basil atau basillus, baasil
berbentuk seperti tongkat pendek agak silindris bentuk basil hampir meliputi
seluruh bakteri, bentuk coccus
(bulat). Kedua bentuk coccus adalah
bentuk bakteri seperti bola-bola kecil, pada golongan ini tidak sebanyak pada
golongan berbentuk basil. Ketiga adalah bentuk spiril (spiral), bentuk spiril adalah bentuk
bakteri yang berbentuk seperti spiral
atau panjang berbengkok-bengkok (Adam 1992).
Bakteri dapat dikembangkan dengan cara
melakukan pertumbuhan bakteri. Pertumbuhan bakteri dapat dilakukan dengan cara
ditumbuhkan pada suatu media pertumbuhan bakteri, yang biasanya berupa agar. Media
adalah tempat di mana mikroorganisme dapat tumbuh dan di dalamnya terdapat
nutrisi makanan untuk pertumbuhan mikroorganisme tersebut. Media dikelompokkan
menjadi dua, yaitu media biasa dan media khusus. Nutrisi dari suatu
mikroorganisme amat beragam, namun kebutuhan akan nutrisi pada dasarnya sama
yaitu air, sumber energi, zat hara sebagai karbon, nitrogen, sulfur, phospat
oksigen, hidrogen, mineral dan faktor tumbuh yaitu berupa asam amino, pigmen
atau nukleusida. Media umumnya berfungsi untuk mengisolasi mikroba,
memperbanyak mikroba, pengujian sifat fisiologi, dan untuk perhitungan jumlah
mikroba (Hardioetomo 1983).
Tujuan
Praktikum
ini bertujuan untuk mempelajari prosedur umum untuk merekontruksi medium
berbentuk bubuk (terdehidrasi) dan menaruhnya dalam jumlah yang dikehendaki ke
dalam wadah-wadah yang sesuai serta mempelajari ciri morfologi dan kultural
mikroorganisme yang tumbuh sebagai koloni murni.
Alat
dan Bahan
Bahan-bahan
yang digunakan ialah medium NA, medium LB, dan akuades.
Alat-alat
yang digunakan adalah gelas ukur, Erlenmeyer, timbangan, spatula, batang pengaduk, hotplate,
tabung reaksi dan cawan petri steril, kapas sumbat, keranjang tabung, pipet
Mohr steril, bulp, autoclave, magnetic stirer dan alumuniumfoil.
Prosedur
Kerja
Penyiapan
dan penempatan media dilakukan dengan cara sebanyak 2,688 g medium NA dan 0,52 g LB ditimbang, medium NA tersebut dimasukkan
ke dalam Erlenmeyer sedangkan medium LB dimasukkan ke dalam gelas piala.
Kemudian air suling sebanyak 96 mL dimasukkan ke dalam Erlenmeyer yang berisi
medium NA tadi dan air suling sebanyak 40 mL dimasukkan ke dalam gelas piala
yang berisi medium LB tadi. Masing-masing medium dicampurkan rata dengan
magnetic stirer sambil dipanaskan di atas hotplate. Setelah distirer, medium NA
disumbat dengan sumbat kapas dan dilapisi alufo agar tertutup rapat dan pada
medium LB yang sudah tercampur rata tersebut kemudian dituang dalam tabung
reaksi sebanyak 5 mL per tabung reaksi dan dibuat 8 tabung reaksi.
Screening
bakteri dilakukan dengan cara cawan petri yang sudah terdapat media agarnya
yang telah disterilkan dibuka di tempat yang ingin diidentifikasi bakterinya
seperti lorong CB selama 2-3 menit. Kemudian tutup cawan petri yang berisi
media agar tersebut dan dimasukkan ke dalam inkubator selama 18-24 jam dan
hasilnya diamati.
Data
dan Hasil Pengamatan
Massa medium NA 28 g/L yang harus ditimbang untuk 8 cawan
petri :
Volume 1 cawan petri = 12 mL à 8 cawan petri = 12 
mL
mL
Massa NA = 
= 2,688 gram
= 2,688 gram
Massa medium LB 13 g/L yang harus ditimbang untuk 8
tabung reaksi :
Volume 1 tabung reaksi = 5 mL à 8 tebung reaksi = 5 
Massa LB = 
= 2,688 gram
= 2,688 gram
Tabel 1 Hasil screening Lab CB
Mikrobiologi
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|||
|
Warna
|
Kuning
|
Kuning
|
Putih titik hitam
|
Putih
|
Putih kukuningan
|
|
Ukuran
|
Sedang
|
Sedang
|
Kecil
|
Sedang
|
Sedang
|
|
Bentuk
|
Filamentous
|
Circular
|
Circular
|
Filamentous
|
Iregular
|
|
Elevasi
|
Puluinate
|
Puluinate
|
Puluinate
|
Puluinate
|
Umbonate
|
|
Permukaan
|
Halus
|
Licin
|
Halus
|
Halus
|
Mengkilap
|
|
Margins
|
Undulate
|
Entire
|
Erose
|
Undulate
|
Undulate
|
|
Jumlah
|
1
|
10
|
1
|
4
|
1
|
|
Gambar
|
 |
|
|
 |
|
Table
2 Hasil screening WC LT
Tabel
3 Hasil screening di kloset (kamar mandi wanita)
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|
Warna
|
Putih
|
Putih
|
|
Ukuran
|
Besar
|
Noftah
|
|
Bentuk
|
Irregular
|
Circular
|
|
Elevasi
|
Rata
|
Rata
|
|
Permukaan
|
Halus
|
Halus
|
|
Margins
|
Entire
|
Entire
|
|
Jumlah
|
7
|
7
|
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|
Gambar
|
 |
 |
Table
4 Hasil screening Kantin Dalam
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|||
|
Warna
|
kuning
|
Biru
|
putih
|
putih
|
Biru
|
|
Ukuran
|
Sedang
|
sedang
|
besar
|
besar
|
sedang
|
|
Bentuk
|
Punctiform
|
circular
|
filamentou
|
filamentous
|
Circular
|
|
Elevasi
|
pulvinate
|
Pulvinate
|
umbonate
|
umbonate
|
pulvinate
|
|
Permukaan
|
menonjol
|
menonjol
|
rata
|
rata
|
Menonjol
|
|
Margins
|
entire
|
entire
|
undulate
|
undulate
|
Entire
|
|
Jumlah
|
1
|
2
|
17
|
10
|
1
|
|
Gambar
|
 |
 |
|||
Tabel
5 Hasil screening Kantin 4
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|||
|
Warna
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
|
Ukuran
|
Sedang
|
Besar
|
Sedang
|
Sedang
|
Besar
|
|
Bentuk
|
Sirkular
|
Filamentous
|
Irregular
|
Sirkular
|
Filamentaous
|
|
Elevasi
|
Raised
|
Flat
|
Undulate
|
Raised
|
|
|
Permukaan
|
Licin
|
Halus
|
Licin
|
Licin
|
Halus
|
|
Margins
|
Entire
|
Entire
|
Undulate
|
Entire
|
Entire
|
|
Jumlah
|
|
15
|
1
|
9
|
7
|
|
Gambar
|
 |
 |
|||
Tabel
6 Hasil screening kolam IPAL
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|
|
Warna
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
|
Ukuran
|
Sedang
|
Sedang
|
Kecil
|
|
Bentuk
|
Irregular
|
Irregular
|
Irregular
|
|
Elevasi
|
Umbunate
|
Umbunate
|
Umbunate
|
|
Permukaan
|
Undulate
|
Undulate
|
Entire
|
|
Margins
|
Undulate
|
Undulate
|
Undulate
|
|
Jumlah
|
6
|
1
|
1
|
|
Gambar
|
 |
 |
|
Tabel
7 Hasil screening rak sepatu Laboratorium Mikrobiologi
|
|
Cawan
1
|
Cawan
2
|
||
|
Warna
|
Puti
pucat
|
Putih
|
Kuning
muda
|
Kuning
muda
|
|
Ukuran
|
Besar
|
Kecil
|
Kecil
|
Kecil
|
|
Bentuk
|
Rizoid
|
Irregular
|
Sirkular
|
Sirkular
|
|
Elevasi
|
Konveks
|
Konveks
|
Konveks
|
Konveks
|
|
Permukaan
|
Kasar
|
Rata
|
Rata
|
Rata
|
|
Margins
|
Filamen
|
Entire
|
Entired
|
Entired
|
|
Jumlah
|
6
|
5
|
4
|
1
|
|
Gambar
|
 |
 |
||
Tabel 8 Hasil screening pada lorong CB KIM
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
||
|
Warna
|
Putih Kekuningan
|
Putih
|
Putih Kekuningan
|
Putih
|
|
Ukuran
|
Kecil
|
Besar
|
Noktaf
|
Sedang
|
|
Bentuk
|
Circular
|
Irregular
|
Circular
|
Filament
|
|
Elevasi
|
Umbonate
|
Flat
|
Konveks
|
Raised
|
|
Permukaan
|
Mengkilap
|
Licin
|
mengkilap
|
Halus
|
|
Margins
|
Rata
|
Rata
|
Rata
|
Filament
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|||
|
Jumlah
|
4
|
7
|
4
|
2
|
|
Gambar
|
 |
 |
||
Tabel 9 Hasil screening rambut
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
||
|
Warna
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
Putih
|
|
Ukuran
|
Kecil
|
Sedang
|
Noktah
|
Kecil
|
|
Bentuk
|
Irregular
|
Sirkular
|
Irregular
|
Sirkular
|
|
Elevasi
|
Umbonate
|
Raised
|
Umbonate
|
Raised
|
|
Permukaan
|
Licin
|
Licin
|
Licin
|
Licin
|
|
Margins
|
Undulate
|
Filamen
|
Undulate
|
Filamen
|
|
Jumlah
|
1
|
1
|
1
|
1
|
|
Gambar
|
 |
 |
||
Tabel 10 Hail screening nafas
|
|
Cawan 1
|
Cawan 2
|
|
Warna
|
Putih
|
Putih
|
|
Ukuran
|
noktah
|
Kecil
|
|
Bentuk
|
Sirkular dengan tepi poriferal
|
Rizoid dan menyebar
|
|
Elevasi
|
Rata
|
Umbonate
|
|
Permukaan
|
Licin
|
Halus
|
|
Margins
|
entire
|
Filamentals
|
|
Jumlah
|
1
|
1
|
|
Gambar
|
 |
 |
Pembahasan
Media adalah suatu substrat dimana mikroorganisme dapat tumbuh yang
disesuaikan dengan lingkungan hidupnya. Media kultur berdasarkan konsistensinya
dibedakan atas tiga macam, yaitu, media cair (liquid medium), media semi padat (semi solid medium), dan media padat (solid medium). Contoh dari media cair yaitu seperti NB (Nutrient Broth ), Lactose Broth (LB) dan kaldu sapi. Contoh dari media semi padat
yaitu agar dengan konsentrasi rendah 0,5%, dan SIM (Sulfida Ino Motil) dan contoh dari media padat yaitu Nutrient Agar (NA), Plate Count Agar (PCA), Potato
Dextrose Agar (PDA), gelatin, silika gel dan beberapa limbah pertanian berbentuk
padat.
Salah satu
syarat media yang baik ialah media harus mempunyai tekanan osmotik, tegangan
permukaan, dan pH yang sesuai dengan kebutuhan mikroba. Keasaman (pH) media
penting bagi pertumbuhan mikroorganisme,terutama kerja enzim sebagai bakteri tumbuh
baik pada pH 7 sehingga dalam pembuatan media harus disesuaikan pH-nya. Media
dalam pembuatannya juga harus memperhatikan bahwa bahan–bahan yang digunakan
merupakan bahan baku. Hal ini dilakukan agar hasil yang didapat dari percobaan
tidak dipengaruhi oleh bahan–bahan yang digunakan, sehingga dimanapun percobaan
dilakukan maka hasil yang diperoleh akan tetap sama. Suhu juga mempengaruhi
laju pertumbuhan dari bakteri dan jumlah total pertumbuhan organisme. Suhu
inkubasi (37 OC) merupakan suhu optimal dimana bakteri dapat tumbuh
dengan baik. Faktor yang menyebabkan suatu bakteri dapat tumbuh pada suatu
media tertentu ialah sumber energi, karbon, nitrogen, vitamin, air, dan unsur
lain (P,S,K,Na,Caa,Mg,Mn,Fe,Zn,Co,Cu, untuk pertumbuhan).
Media yang
digunakan dalam percobaan pembuatan media adalah NA (Nutrient Agar) dan LB (Lactose Broth). Nutrient Agar (NA) bersifat
padat dengan kadar 28 g/L air destilat berfungsi untuk identifikasi umum
mikroba, sedangkan Lactose Broth (LB) yang bersifat cair dengan kadar 13 g/L air destilat. Pembuatan media
NA dilakukan pencampuran dengan stirer sambil
dipanaskan yang berfungsi untuk menghomogenkan antara NA dengan akuades
sedangkan pada LB tidak digunakan pemanasan dan hanya di kocok dengan
menggunakan stirer saja. Hal ini
dikarenakan medium NA sulit larut dalam air sehingga perlu pemanasan agar cepat
terlarut dan homogen. Kemudian medium NA dalam Erlenmeyer disumbat dengan kapas
yang dilapisi alumuniumfoil (alufo),
sumbatan tersebut bertujuan agar pada saat dimasukkan ke dalam autoclave medium tersebut tidak tumpah
karena penumpukan medium yang lain.
Bakteri dapat dikembangkan dengan cara
melakukan pertumbuhan bakteri. Pertumbuhan bakteri dapat dilakukan dengan cara
ditumbuhkan pada suatu media pertumbuhan bakteri, yang biasanya berupa agar. Media agar merupakan substrat yang
sangat baik untuk memisahkan campuran mikroorganisme sehingga masing-masing
jenisnya menjadi terpisah-pisah. Teknik yang digunakan untk menumbuhkan
mikroorganisme pada media agar memungkinkannya untuk tumbuh berhimpun membentuk
koloni, sekelompok massa sel yang dapat dilihat dengan mata telanjang. Semua
sel dalam koloni tersebut sama, dianggap merupakan keturunan satu
mikroorganisme dan mewakili mikrobiologiwan. (Pelczar 2006).
Menurut Lud Waluyo dalam bukunya yang berjudul Teknik
dan Metode Dasar dalam Mikrobiologi pertumbuhan mikroorganisme dalam medium
dapat tumbuh dengan baik apabila memenuhi persyaratan, antara lain harus
mengandung semua nutrient yang mudah digunakan oleh mikroorganisme, medium
harus mempunyai tekanan osmosis, tegangan permukaan, dan pH yang sesuai dengan
pertumbuhan mikroorganisme, medium tidak mengandung zat yang menghambat
pertumbuhan mikroorganisme dan medium harus steril sebelum digunakan. Media yang digunakan adalah PCA (Plate Count Agar). PCA digunakan sebagai
medium untuk mikroba aerobik dengan inokulasi di atas permukaan. Semua jenis
mikroba dapat tumbuh dengan baik pada media PCA ini karena di dalam PCA
mengandung komposisi casein enzymic hydrolisate yang menyediakan asam amino dan
substansi nitrogen kompleks lainnya, serta ekstrak yeast yang mensuplay vitamin
B kompleks.
Screening bakteri yang dilakukan di lorong
gedung CB dengan membuka cawan petri berisi agar selama 2-3 menit lalu ditutup
dan dimasukkan ke dalam ikubator agar bakteri yang tertangkap dapat tumbuh
dalam media. Ketika akan dimasukkan inkubator cawan diletakkan secara terbalik,
karena dikhawatirkan pada saat proses inkubasi terdapat uap air yang terbentuk
dan menetes pada permukaan media sehingga menyebabkan media menjadi rusak dan
hasil percobaan sulit diamati. Percobaan terhadap screening bakteri dihasilkan data seperti pada tabel 8. Hasil dari screening di
lorong CB ternyata menghasilkan bakteri yang berbeda-beda, itu terlihat dari
hasil pengamatan dengan ukuran, pigmentasi, bentuk, tepi, dan elevasi yang
berbeda-beda. Bakteri yang diperoleh pada screening bakteri berbagai macam ukuran,
namum pada cawan 2 yang menghasilkan bakteri berukuran noktaf. Pada pengamatan
pertama bakteri belum tumbuh sempurna, sehingga pengamatan dilakukan selama
2x24 jam kemudian dan hasilnya tumbuh bakteri-bakteri dengan berbagai jenis.
Pengamatan yang lama ini disebabkan oleh kemungkinan-kemungkinan tertentu
diantaranya adalah kurangnya komponen-komponen yang dibutuhkan bakteri pada
media seperti vitamin, protein dan lainnya.
Simpulan
Berdasarkan percobaan dapat disimpulkan bahwa pada lorong
CB terdapat bakteri yang dapat tumbuh pada media agar PCA..
Daftar Pustaka
Adam Syamsunir.1992. Dasar-Dasar Mikrobiologi
dan Parasitologi untuk Perawatan.Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran
EGC.
Hardioetomo R. S. 1983. Mikrobiologi dalam Praktek. Bogor:IPB-Press.
Pelczar, Michael. 2006.Dasar-Dasar Mikrobiologi.
Ratna Sri, penerjemah. Jakarta: Universitas Indonesia Press.terjemahan dari : Elements
of Microbiology.
Singleton Paul.2006. Dictionary of
Microbiology And Molecular Biology
Third Edition. England : John wiley & Sons Inc.
Waluyo, Lud. 2006. Teknik dan Metode
dalam Mikrobiologi. Malang: UMM Press
Tidak ada komentar:
Posting Komentar